紫外分光光度计的性能检验实验
实验室k / 2019-08-07
一、目的
本实验使学生初步掌握紫外分光光度计部分性能的鉴定方法及仪器的使用方法。
二、提要
分光光度计性能的好坏，直接影响测定结果的准确程度。各国药典中所采用的分光光度法大致分两类：一以美国药典为代表，不给出纯品的吸收系数，但需备有标准品，测定时样品和标准品同时操作，以抵消仪器的误差；另一以英国药典为代表，项目中给出纯品的吸放系数，定量时与已知的吸收系数相比较即可，但对仪器的性能要求甚高。我国目前采用英国药典常用法。
三、方法
1.吸收池的配对性 石英制的吸收池对紫外线亦稍有吸收，1cm的吸收池在220~280nm的波长范围内，以空气为100％，其透光率往往小于100％，且每个吸收池吸收多少也不完全相同，在每次测定前应做吸收池的配对检验。
检验方法同比色法中比色皿的检验。
2.波长精度和重现性 用氢灯校正379～656nm一段谱带中的几个谱线，229～268nm一段谱线可用苯的吸收峰校正。
先以486.13nm氢灯谱线来校正仪器。将选择开关转至×0.1，透过率读数放在100(或将选择开关转至×1透过率读数放在10)，关小狭缝打开光门，缓缓转动波长旋钮寻找氢灯486.13nm峰出现的位置，然后按下列氢灯谱线测试656.28、581.21、486.13、434.05、379.79nm。
在短波段，因氢灯无分裂的谱线，可用苯的吸收峰校正波长。在25ml容量瓶内，滴入一滴苯(A.R.)，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀后，以无水乙醇为空白，在225～270nm间用1cm石英池测定吸收度，苯在无水乙醇中的吸收峰如下：
229.2 233.9 238.9 243.3
248.5 254.5 260.6 268.4
在吸收峰附近每隔0.1nm测一读数。
此外也可用镤钕玻璃检查波长精度，751型及CΦ-16型均备有镨钕玻璃滤光片。
对波长精度和重现性的要求如下表(汞灯谱线)。
汞灯谱线的波长与精度及重现性的要求
| 波长(nm) |
精度(nm) |
重现性(nm) |
|
230.21
237.83
253.65
275.28
296.73
312.57
365.02
404.66
|
±3.0
±3.0
±3.0
±3.5
±3.5
±0.45
±0.60
±0.70
|
±0.15
±0.15
±0.15
±0.20
±0.20
±0.30
±0.30
±0.35
|
注：如用氢灯测定时，可参考近似的汞灯波长以确定精度与重现性的要求。
3.分辨率 用汞灯，狭缝宽度为0.02mm时，汞的365.02、365.48及366.33nm三条谱线应能分清，在仪器上有明显反应。
4.吸收值精度和仪器线性范围
(1)仪器和试剂：感量为0.1mg的分析天平，天平和砝码应经过检定，合乎要求。500ml容量瓶、25ml容量瓶，凡容量仪器均应经过校正合格。
蒸馏水应用玻璃磨口蒸馏器重蒸，贮于带玻璃塞的瓶中。
0.02mol/L的H2SO4(A.R)，用上述蒸馏水配制，不必标定，但应一次配成1500ml以上，备用。
重铬酸钾标准试剂备用。
(2)溶液配制方法：精密称取在105℃干燥至恒重的重铬酸钾基准试剂0.2g(称准至0.1mg)，置500ml容量瓶中，用0.02mol/L的H2SO4液溶解，并稀释至500ml，摇匀。
用滴定管精密量取上述重铬酸钾溶液1ml、2ml、3ml、…、10ml分别置于25ml容量瓶中，均用0.02mol/L的H2SO4稀释至刻度，摇匀。
(3)测定方法：选好配对的1cm石英比色池，以0.02mol/L的H2SO4为空白，在波长235nm处测定各试液的吸收值(当吸收值大于1后，用×01档)。
(4)计算方法：根据称样及稀释度，计算出各个的吸收系数，在直角坐标纸上，以各吸收值为横坐标，相应的吸收系数为纵坐标，绘出吸收系数-吸收值曲线。
一般来说，仪器测出的吸收系数，在吸收值过小时，常偏高，过大时，常偏低，其间有一段坪区，在这区间测出的吸收值计算出的吸收系数是一个常数，它与平均值的偏差不超过±0.2％的一段，为这台仪器的线性范围或最佳工作范围。
波长(nm) 吸收系数(E1cm1%) 允许误差
235 124.3 122.0~125.5
5.杂散光 用有玻璃接口的蒸馏器重蒸的蒸馏水和试剂规格的氯化钾1.2g，配成100ml水溶液。以蒸馏水作为空白，用1cm吸收池在200nm波长测定，透过率应小于1.0％。
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