液相色谱仪操作的一些问题
抖化学 / 2022-11-07
溶剂的精制
只要可能，就应使用全玻璃系统蒸馏过的溶剂，并应通过硅胶床精制。一根直径76.2毫米( 3英寸)长1.2米，填充了大约250毫米粗硅胶的柱，应能精制4.5升(1加仑)左右的溶剂。用
于纯制目的的硅胶，不应使用到完全失效，因为如果太多的溶剂通过柱床时，杂质就会象在正常的液相色谱展开中那样从精制柱中流出。
泵的问题
泵的问题通常起因于隔膜型或活塞型泵，常由于改变包括不相混溶液体的流动相而产生。其症状是或者完全失去压力没有泵液作用，或者泵的输出压力波动。如将流动相直接从庚烷换成水，几乎肯定会引起止逆阀的小球粘着，而导致失去压力。这个问题可用泵使丙酮通过系统而解决。因丙酮与庚烷及水均可互溶。用一种与先前采用的所有流动相均能混溶的溶剂通过泵以洗净阻塞的止逆阀的原理，是一种通用的方法。有时止逆阀被硅胶的小颗粒卡住而密封不严。这是由于用作流动相的溶剂未曾仔细滤过。这些硅胶颗粒常常难以除去，必须将止逆阀在盛于超声浴的丙酮中清洗。如果变换溶剂时只用可混溶的溶剂，同时在溶剂的制备方面又注意充分保证色谱系统的清洁，则由泵所引起的故障就非常之少。
注射样品的问题
连续的柱头注样进入固定相床，最终，将导致对柱床的扰动而使效率劣化。这可由在填充物的顶上铺一层10毫米厚的玻璃微珠(直径约40微米)而得以克服，因为对玻璃珠床的扰动将不会明显地影响性能。玻瑞珠床亦有助于注射的样品沿柱径向分配。
另一方面，样品可如前所述那样，注射到位于填充物顶上的不锈钢多孔烧结板上。如果使用样品阀，在将样品装入环管以备进样之前，至少应先以10倍体积的样品溶液冲洗环管。这将保证除去
遗留在环管中的先前的任何痕量样品。
检测器的问题
关于检测器的一个主要问题，是气泡留在检测池中，共表现是峰持久地超出刻度。气泡在柱内的产生，通常由流动相极性的突然变化所引起。气泡的形成，最常见于醇~水混合液。为了消灭气泡的形成，溶剂应在分析之前进行脱气。仅将溶剂在真空下振摇就可很容易地脱气。如有气泡粘着在检测器池中，有两种常用的办法可除去它。(1)柱的流速应显著增大，并将检测池的出口封住，通常是用手指堵住。这样在检测池中建立起压力，气泡体积减小而可以通过池终端的缩口部分。然而应小心勿使检测器中产生很大的压力，因为这可能破坏检测池的密封(通常为聚四氟乙烯封垫)，引起池子泄漏。(2)如上一个方法失败，则应松开检测器和柱之间的联接，用极性溶剂如丙酮反冲洗除去空气。最好用充满丙酮的皮下注射器联接在池的出口来完成这一操作，当气泡已被除去，柱和检测器之间的接头被拧紧之后，注射器才能卸下。
为了减少气泡停留在检测池中的几率，可将柱子联到池的底部，使流出液向上通过池子，并经一个倒置的U形管流出。与另一种联接方法相反，这样对池子加上一个流体静反压，减少了气泡的体积，使之更容易通过池子。
基线不稳
基线不稳定可有短周期噪声、长周期噪声、漂移或这些三种效应中的任何组合形式(见附录I )。
漂移，如其名字所示，是记录笔缓慢地漂过记录纸。漂移通常起因于柱子在更换溶剂后没有完全达到平衡。连续使溶剂流过一段时间之后应能消除漂移。如果是使用液一液色谱法，漂移经常起因于固定相的流失，这一点可由保证进入柱子的流动相在柱温下对固定相完全饱和而得以消除。漂移的另一来源，起因于温度变化。如果溶剂贮槽重新装满不同温度的新鲜溶剂，这可在柱中产生轻微的热梯度，直至达到温度平衡之前，将引起对温度敏感的检测器如折光率检测器、某些情况下还有UV检测器呈现漂移。
短周期噪声可从记录图上的“顿抖”而得以辨认。这种不稳定性，通常起因于记录仪不正确的灵敏度调节或放大器的不稳定性。如噪声来自记录仪，正常的调节通常将能使之消除，但如来
自放大器，则建议请制造厂家进行检修。
长周期噪声，定义为具有相当于流出峰的频率的基线不稳定性，其范围可从几秒钟到近于1分钟。这一类型的噪声是最严重的，因为它是限制检测器灵敏度的因数。这种噪声与流出峰无法识别一一它可起因于各种来源，如柱的流失，沾污的柱，溶剂的杂质和温度的波动。保证-个色谱系统的绝对清洁可使它降低至最小值，但并不能完全消除，因此它是制约着检测器最大灵敏度的根本因数。在检测器设定灵敏度的最大值，长周期噪声不应大于满刻度偏转的1或2 %。
假峰
一个色谱图的解释，常常可被突然出现的假峰弄得混乱。它们可由一些不同的来源所引起。
沾污的注射器
被先前样品沾污了的注射器，可能是引起假峰的最普通的原因。注射器应在每次采样之间仔细地洗净，1微升的注射器更需特别注意。如果可能，它们应在减压条件下，以大量溶剂清洗。
样品物质常常爬到注射器芯子后面，在连续取样时再慢慢洗滤出来。
沾污的隔膜
隔膜可吸附某些样品，当注射器刺穿隔膜时就将痕量的先前的样品带到柱上。这一来源的假峰，可由更换隔膜而得以消除。
溶于样品中的空气
溶于样品中的空气，将在样品被注人那点，使溶剂的折光率发生变化，当此溶剂流出时，可使折光率检测器和UV检测器都产生响应一-UV检测器对折光率也和对溶质吸收一样敏感。在真空条件下轻轻振播以除去溶于样品的空气，将消除这一效应。
样品溶剂的流出
只要可能，样品任何时候都应溶解于流动相,但有时由于溶质的溶解度太差而不可能这样做。在此情况下，常常采用极性更大的溶剂，当样品被注到柱上时，不同的溶剂分别流出而形成假峰。即使流动相保持着原来的成分，但极性更强的组分浓度的增大，仍将使假的溶剂峰出现。例如，假定所用流动相是含5%乙酸乙酯的庚烷，为了得到适当的溶解度，样品溶于含10%乙酸乙酯的庚烷，则由于增大的乙酸乙酯的浓度脉冲，将以完全与空穴色谱法的同一方式被洗脱，所以色谱图仍将显示一个溶剂假峰。
如果必需使用极性更强的样品容剂以保证溶解度，假峰就无法消除，只能把它作为假峰而予以忽视。
检测器的顶替效应
这一效应不是引起假峰的经常原因，但有时能混淆结果。共起因在于流动相中极性更强的溶剂吸附在玻璃或石英检测器池壁上成为一个薄层。当一个极性溶质被洗脱时，可顶替出此吸附层而产生-一个畸形的峰。这一.效应也难以消除，但在有些情况下，可在流动相中用一个较低浓度的、更强的极性溶剂来实现此目的。例如含10%乙酸乙酯的庚烷溶液会被含3%四氢呋哺的庚烷溶液所顶替。变换的原理已在论述溶质一溶剂相互作用的一章(第3章)中阐明。
液相色谱仪操作步骤
先对流动相进行过滤，根据需要选择不同的滤膜，一般为有机系和水系，常用的孔径为0.20um和0.45um。然后对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。一般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器方可稳定，zui重要的是仪器基线走后，方可进样测试。
液相色谱仪注意事项
流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。所有过柱子的液体均需严格的过滤。压力不能太大，不要超过150kgf/cm2 。
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