3-羟基癸酸

（标准品）

 

中文名称     3-羟基癸酸

英文名称     3-HYDROXYDECANOIC ACID

化学式        C10H18O3

分子量        188.26

CAS编号    14292-26-3

质检信息

质检项目       指标值

含量,％         ≥98%

PSA：          57.53000

LOGP：       2.18250

熔点 234.4° 

密度 1.36g/cm3 (20～25℃） 

闪点 >230 °C

规格                  50mg

 

化学特性

1.3-羟基癸酸白色固体。

产品用途

1.3-羟基癸酸用作医药中间体

 

储藏措施

1.储存于阴凉、通风的库房。

2.应与氧化剂、食用化学品分开存放，切忌混储。

3.保持容器密封。      

4.远离火种、热源，防止阳光直射。

5.库房必须安装避雷设备。

6.排风系统应设有导除静电的接地装置。

7.采用防爆型照明、通风设置。

8.禁止使用易产生火花的设备和工具。

9.储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。

10.防止粉尘和气溶胶生成。

急救措施 

【食入】摄入不可能。但是，如果摄入，获得紧急医疗照顾。

【吸入】如果克服被曝光，将受害人转移到空气新鲜处。给予吸氧或人工呼吸。获得紧急医疗照顾。迅速采取行动是至关重要的。

【皮肤】立即脱去污染的衣着。彻底清洗皮肤，用温和的肥皂/水。W /温水冲洗15分钟。如果是粘的，首先使用无水清洁。寻求医疗照顾，如果不良影响或刺激。

【眼睛】眼睛接触的情况下，立即用清水冲洗20-30分钟。经常收回眼皮。获得紧急医疗照顾。

一种生产3－羟基癸酸的方法

本发明涉及一种生产3-羟基癸酸的方法，属基因工程及微生物发酵领域。

基因phaG编码催化由(R)-3-羟基癸酰-酰基转移蛋白向(R)-3-羟基癸酰辅酶A转化的(R)-3-羟基癸酰-酰基转移蛋白辅酶A转酰基酶，单独运用辅酶A转酰基酶即能够催化(R)-3-羟基癸酰-酰基转移蛋白向(R)-3-羟基癸酰辅酶A转化，进而生成3-羟基癸酸。基因phaG来源是很广泛的，它们可以来自绝大多数假单孢菌以及伯克霍尔德氏菌等多种微生物，比如Genebank上的AY039840、AY039839、AF396832、AB047080、AF052507、AF169252、AF209711(Genebank登陆号)等。

一种生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于发酵培养含有基因phaG的重组微生物菌株而获得3-羟基癸酸。

基因phaG的来源选择范围很宽，具有前述功能的微生物基因均可以选择作为phaG的来源。所述基因phaG可以选自下述序列家族中的一种AY039840、AY039839、AF396832、AB047080、AF052507、AF169252、AF209711。

所述重组微生物菌株优选为大肠杆菌。所述大肠杆菌选自JM109、HB101、DH5α或野生型菌株。

实现本发明方法的具体步骤可以是(1)将基因phaG克隆到质粒中构建出新质粒；(2)将所构建质粒转到菌株中构建DNA重组菌株；(3)培养重组菌株获取3-羟基癸酸。

所述重组菌株的培养温度较适宜的为28-42℃；培养的pH值较适宜的为4.5-7.2。

用分批培养的方式或流加(fed-batch)培养的方式及补加三氯生培养的方式培养所述重组菌均会取得较好的效果。

本发明巧妙地运用基因phaG编码催化由(R)-3-羟基癸酰-酰基转移蛋白向(R)-3-羟基癸酰辅酶A转化的(R)-3-羟基癸酰ACP辅酶A转酰基酶，单独运用即能够催化(R)-3-羟基癸酰ACP向(R)-3-羟基癸酰辅酶A转化，进而生成3-羟基癸酸的原理，运用基因工程及微生物发酵相结合的方法，创造性地使一步法直接生产3-羟基癸酸得以实现。简化了从聚合物降解获得3-羟基癸酸的生产工艺，提高了生产效率，降低了传统化学合成对设备的高要求，简化了繁琐的工艺流程，省去了手性分离的复杂过程，因此可以使3-羟基癸酸的生产成本得到大幅度降低。同时利用本发明的方法生产3-羟基癸酸还解决了由于化学合成和手性分离带来的环境污染问题本发明所涉及的质粒构建与重组菌株筛选均采用现有基因工程操作的方法，包括对含有基因phaG的DNA片段和所用质粒进行PCR扩增，限制酶切割，连接酶连接，质粒转化，重组菌株筛选，重组菌株的培养，产物合成的确认及高性能重组生产菌株的获得等。发酵过程中不需购置新的设备，既可以采用微生物常规工业发酵方法，也可以采用自动控制为基础的流加发酵法。

下面结合附图对本发明的具体实施例做进一步说明。

质粒构建如

图1所示，从含有基因phaG的质粒中，采用PCR方法得到phaG的基因片断，限制性内切酶XbaI和HindIII双酶切后片段插入质粒载体pBluescriptSK-中。所得到的质粒pLZZGPp含有位于启动子lac下游的基因pbaG。所用引物为上游引物5’-GGT TCTAGACTGCAGGAGTCGATGACATGAGGC-3’；下游引物为5’-TCCAAGCTTCCCGGGCTCAGATGGCAA ATGCATG-3’。培养基为LB培养基(g/L)蛋白胨10，酵母浸出物5，NaCl 10；或矿物培养基(g/L)4.5 Na2HPO4.2H2O，1.5 KH2PO4，0.5(NH4)2SO4，0.2 MgSO4，0.05Fe(III)-NH4-Citrate(17％)，0.02 CaCl2·2H2O以及SL-6微量元素。为了维持质粒在重组菌中的传代，应加入100mg/L氨卞青霉素。碳源可以选择葡萄糖或果糖，浓度根据需要而定。

质粒转化用电击转化法或化学转化法将质粒转入菌株E.coli。

在该实施例中，大肠杆菌E.coli还可以选自JM109，DH5α以及野生型大肠杆菌如AB1157等，phaG还可以是AY039840、AY039839、AF396832、AB047080、AF169252、AF209711，但构建基因重组菌株的方法和步骤是相同的。

实施例2、以葡萄糖为碳源利用重组大肠杆菌在LB培养基上合成3-羟基癸酸菌种含质粒pLZZGP的重组大肠杆菌HB101，(质粒中基因phaG为AF052507)质粒转化方式电转化法培养温度37℃培养基LB培养基初始pH7.2培养48小时后pH4.5发酵时间48小时搅拌转速200rpm工艺流程如下将种子液接入加有灭菌发酵液的摇瓶中，接种量为每100毫升发酵液接入2毫升种子液。葡萄糖起始浓度5g/L。9小时后加入1mMIPTG，12小时后加入15g/L葡萄糖。发酵结束后，对样品离心、洗涤、分析得到细胞干重和3-羟基癸酸含量等有关数据。

分析结果表明，48小时后得到3-羟基癸酸含量为196mg/L。

实施例3、以果糖为碳源利用重组大肠杆菌在LB培养基上合成3-羟基癸酸菌种含质粒pLZZGPp的重组大肠杆菌HB101，(质粒中基因phaG为AF052507)质粒转化方法电击转化法培养温度37℃培养基LB培养基初始pH7.2培养48小时后pH5.0发酵时间48小时搅拌转速200rpm工艺流程如下将种子液接入加有灭菌发酵液的摇瓶中，接种量为每100毫升发酵液接入2毫升种子液。果糖起始浓度5g/L。9小时后加入1mMIPTG，12小时后加入25g/L果糖。发酵结束后，对样品离心、洗涤

分析得到细胞干重和3-羟基癸酸含量等有关数据。

分析结果表明，48小时得到3-羟基癸酸678mg/L。

实施例4、补加三氯生(triclosan)为添加剂，以果糖为碳源利用重组大肠杆菌在LB培养基或矿物培养基上合成3-羟基癸酸菌种含质粒pLZZGPp的重组大肠杆菌HB101，(质粒中基因phaG为AF052507)质粒转化方法电击转化法培养温度35℃培养温度37℃培养基LB培养基或矿物培养基初始pH7.2培养48小时后pH5.0发酵时间48小时搅拌转速200rpm工艺流程如下将种子液接入加灭菌发酵液的摇瓶中，接种量为每100毫升发酵液接入2毫升种子液。果糖起始浓度5g/L。9小时后加入1mMIPTG，12小时后加入15g/L果糖，24小时后加入0.1mg/L三氯生。发酵结束后，对样品离心、洗涤、分析得到细胞干重和3-羟基癸酸含量等有关数据。

分析结果表明，48小时得到3-羟基癸酸342mg/L(矿物培养基上)及722mg/L(LB培养基上)。

权利要求

1.一种生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于发酵培养含有基因phaG的重组微生物菌株而获得3-羟基癸酸。

2.根据权利要求1所述的生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于所述基因phaG选自下述序列家族中的一种AY039840、AY039839、AF396832、AB047080、AF052507、AF169252、AF209711。

3.根据权利要求1所述的生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于所述重组微生物菌株为大肠杆菌。

4.根据权利要求1或2或3所述的生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤(1)将基因phaG克隆到质粒中构建出新质粒；(2)将所构建质粒转到菌株中构建DNA重组菌株；(3)培养重组菌株获取3-羟基癸酸。

5.根据权利要求4所述的生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于所述重组菌株的培养温度为28-42℃。

6.根据权利要求4所述的生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于所述重组菌株的培养pH值为4.5-7.2。

7.根据权利要求4所述的生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于用分批培养的方式培养所述重组菌株。

8.根据权利要求4所述的生产3-羟基癸酸的方法，其特征在于用补加三氯生培养的方式培养所述重组菌株。

全文摘要

本发明公开了一种生产3－羟基癸酸的方法,其目的是提供一种工艺简单,具有一定生产效率的制备3－羟基癸酸的方法。本发明的技术方案是发酵培养含有基因phaG的重组微生物菌株而获得3－羟基癸酸。实现本发明方法的具体步骤可以是:(1)将基因phaG克隆到质粒中构建出新质粒;(2)将所构建质粒转到菌株中构建DNA重组菌株;(3)培养重组菌株获取3－羟基癸酸。本发明运用基因工程及微生物发酵相结合的方法,创造性地使一步法直接生产3－羟基癸酸得以实现。简化了从聚合物降解获得3－羟基癸酸的生产工艺,提高了生产效率,具有广泛的应用价值。

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产品信息
[颜色]	白色
[重量]	50mg