抗生素检定培养基1号

中文名称：抗生素检定培养基1号

中文别名：抗生素检定培养基1号(高pH),抗生素检定培养基1号（低pH)

英文名称：Antibiotic Agar NO.1

产品货号：HB5194

产品规格：250g

保质期：  三年

质检信息

质检项目        指标值

蛋白胨          5.0

牛肉浸出粉      3.0

磷酸氢二钾      3.0

琼脂            20.0

pH值7.9 ± 0.1  25℃

 

产品用途

抗生素检定培养基1号用作链霉素、卡那霉素、庆大霉素、红霉素等效价测定。

用法

称取本品 31.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水中,115℃高压灭菌 30分钟,备用。

抗生素检定培养基微生物质控结果：

抗生素检定培养基1号（高pH)微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养14-16小时。

注：回收率计算时，用TSA琼脂做对照培养基

质控菌株	菌株编号	接种量(CFU)	回收率	生长情况	其它特征
枯草芽孢杆菌	CMCC(B)63501	50-100	≥70%	+++	/
短小芽胞杆菌	CMCC(B)63202	50-100	≥70%	+++	/

 

红霉素微生物检定法操作及注意事项：

一、红霉素概述

红霉素系大环内酯类抑菌性抗生素,但在高浓度时对高度敏感的细菌也有杀菌作用。临床上主要用于治疗支原体肺炎、沙眼衣原体引起的新生儿结膜炎、婴儿肺炎、生殖泌尿道感染、军团菌病、皮肤软组织感染，空肠弯曲菌肠炎以及梅毒、痤疮等症。本品为白色或类白色的结晶或粉末，在甲醇、乙醇或丙酮中易溶，在水中极微溶解。本品在pH<6时易被破坏。红霉素制剂肠溶剂为主要剂型，以克服红霉素对酸的不稳定性及降解物对胃肠道的刺激等缺点，此外还有红霉素眼膏、软膏及栓剂等。

二、2015版中国药典效价测定方法及注意事项

(1)培养基:抗生素1号培养基(pH为7.8~8.0)

(2)试验菌:短小芽孢杆菌(cmCC (B) 63202)

(3)缓冲液:取磷酸氢二-钾5.59g与磷酸二 氢钾0.41g,加水使其成1000ml,滤过，在115C温度下灭菌30min,制成pH值为7.8的磷酸盐缓冲液。

(4)双碟的制备:菌层培养基菌悬液的量约为培养基量的2%,加菌悬液量可视抑菌圈大小及清晰程度进行调整。

(5)制备供试溶液:

A、红霉素原料药供试溶液:精密称取该供试品适量(约相当于红霉素50mg)，置50m1的量瓶中，加Z醇( 每10mg红霉素加4ml乙醇)溶解后,用灭菌水制成每1m1中约含1000单位的溶液，再用磷酸缓冲液( pH7.8)制成抗生素浓度范围为5.0-20. 0单位/m1的高、低剂量溶液，即得。

B、红霉素肠溶衣片供试溶液:取本品4片，研细，用乙醇适量(红霉素0. 25g,加乙醇25ml)研磨使溶解,用灭菌水制成每1m1中约含100单位的溶液，再用磷酸盐缓冲液(pH7. 8)制成抗生素浓度范围为5.0-20. 0单位/m1的高低剂量溶液，即得。

C、红霉素软膏供试溶液:取本品，精密称取适量(约相当于红霉素10mg)，置分液漏斗中，加石油醚20ml,缓缓振摇，使基质溶解，用磷酸盐缓冲液(pH为7. 8-8.0)提取4次，每次约25ml,合并提取液，置100m1量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH为7.8-8.0)至刻度,制成每1m1中约含1000单位的溶液，再用磷酸盐缓冲液制成抗生素浓度范围为5.0-20.0单位/m1的高、低剂量溶液，即得。

(6)培养温度和时间:培养温度为35- -37C，培养时间为14-16h。

三、测定中的关键点、易出现的问题及注意事项

(1)称量:本品微有引湿性,称取样品时除注意准确称量外,特别是环境湿度较高时,尚需注意称量过程中的吸湿问题，以免引入误差。

(2)供试品制备:检测中曾发现因红霉素溶解不完全，使含量测定结果低的情况。溶解供试品时，尤其是制剂，因辅料对主药的包裹吸附等作用，影响红霉素的溶出,应用超声处理等使其完全溶解。

(3)培养基:红霉素含量测定，对培养基的质量要求较苛刻。尽量选择批量生产的质量稳定性好的培养基进行测定(我公司有成品干粉培养基,检测效果好，可购买使用)。

(4)缓冲液: USP23版采用pHB.0磷酸盐缓冲液稀释样品,而中国药典采用pH7.8的磷酸盐缓冲液,经比较二者对效价测定结果无明显影响。

(5)双碟的制备:中国药典对红霉素品种双碟的制备没有特殊的要求。底层培养基冷却凝固后，铺加菌层培养基前，应注意保温，一般可以将双碟放置在37C的恒温箱中，临加上层培养基时取出。待菌层完全冷却凝固后,再放置牛津杯(也可用我公司生产的四联式牛津杯)，牛津杯稳定后 ,开始滴加药液。

(6)滴加药液:每组滴加的双碟数以不超过5个为宜,以免扩散时间相差过大，造成结果误差。

抗生素检定培养基1号（低pH)

中文名称：抗生素检定培养基1号（低pH)

英文名称：AntibioticAgar No.1

产品货号：HB5195

产品规格：250g

保质期：三年

质检信息

质检项目        指标值

蛋白胨           5.0

牛肉浸粉         3.0

磷酸氢二钾       3.0

琼脂             15.0

pH值6.5-6.6      25℃

 

产品用途

用于磺苄青霉素效价检定。

检验原理

本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性相关;比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。

 

用法

称取本品26g,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水中,116℃高压灭菌 20 分钟,备用。

 

抗生素检定培养基微生物质控结果：

抗生素检定培养基1号（低pH）微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养14-16小时。

注：回收率计算时，用TSA琼脂做对照培养基。

质控菌株	菌株编号	接种量(CFU)	回收率	生长情况	其它特征
枯草芽孢杆菌	CMCC(B)63501	50-100	≥70%	+++	/

 

生素检定培养基I号（低pH）实验及注意事项：

操作步骤

1、称取本品26.0g,加热搅拌溶解于1000ml纯化水中，116℃高压灭20分钟，备用；

2、菌悬液的制备。枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501): 取枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35-37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检测，应有美85%上。用灭菌水将芽跑洗下，在65℃加热30分钟，备用;

3、取平板分别注入加热融化的培养基20ml,放置水平台面上使凝固，作为底层。另取培养基适量培养基,放冷至48-50℃加人规定的试验菌悬液适量，摇匀。在平板中分别加入5ml,使在底层上均的摊布，作为菌层，放置在水平台上冷却凝固。

4、在平板中放置牛津杯。无菌镊子夹住HB四连式牛津杯正面的凸点，将其放置在菌层培养基表面上，如图1，将压杯板盖上，压住牛津杯5秒左右,使4个小杯与培养基表面紧密接触，防止出现缝隙导致漏液，然后小心拿走压杯板。如图2。

微生物试验

接种以下质控菌株，在36土1C培养14-16小时: 

质控菌株	菌株编号	接种量(CFU)	生长情况	其它特征
枯草芽孢杆菌	CMCC(B)63501	/	+++	抑菌圈大小18mm-22mm

 

抗生素检定培养基I号(低pH)质控结果:

注意事项

1、注入培养基总量不大于20ml,否则放置牛津杯后平皿盖无法盖紧。

2、菌量浓度适宜,若菌量浓度过小，则菌层生长弱做不出抑菌圈。

3、菌层培养基表面一定要平整,否则会导致牛津杯漏液。

4、hB四连式牛津杯中央有凸点且平衡翼上标有“海博生物”字体的为产品正面。

5、压杯板已经辐照灭菌，可以直接使用;多次使用，可用酒精棉擦拭即可。

6、将平皿转移至培养箱培养过程中轻拿轻放，避免剧烈震动，不要堆置培养，以免影响实验效果

 

产品信息
[重量]	250g
[颜色]	白色
危险性类别
[危险性类别]	非危险品