维生素B1的检定法
这种維生素有各种不同的名称,如硫胺(素)、抗神经炎素、妥魯灵(Torulin),具有如下的結构:
由于它的-NH2基,使它可以进行下列热解縮合:
2RNH2 → RNHR+NH3
因此,如果维生素B1在硫代巴比土酸共存下和草酸二甲酯一起加热,就会形成红色产物,这个反应涉及热解所产生的氨,作用于草酸二甲酯形成草酰胺。因此,对于热解产生氨的化合物的检定法中所述操作手续,可以适用于它的盐酸盐。鉴定限度为2.5微克盐酸維生素B1。
由于并未見过含一氨基的它种維生素,所以这一根据草酸二甲酯和硫代巴比土酸存在下的热解来檢定盐酸(硝酸)維生素B1的方法,在研究混合維生素方面,就可能具有价値了。
如有热解釋出氨的化合物同时存在,这个試驗法就不可使用。
維生素B1(盐酸盐,硝酸盐)含有的硫,可以加入磷钨酸使其从稀溶液中沉淀下来。沉淀经离心分离后,可以进行硫的检驗。这法也可用于檢定混合维生素中的维生素B1盐。
维生素B6的检定法
很多种自由对位的酚类可和2,6-二氯苯醌-4-氯亚胺縮合,形成有色的靛酚类,这些都是酸-碱指示剂。維生素B6(盐酸吡哆醇)含有一个酚型-OH基与一个自由对位,其反应如下:
这一棕-黄色縮合产物暴露于氨时,由于形成一种不稳定的酚铵,顏色变蓝。
操作手续 滤紙溶浸于2,6-二氯苯醌-4-氯亚胺的饱和苯溶液,并在空气中干燥。小量固体試样抹在試紙上,或放上水溶液一滴,就有棕-黄色斑点出現,在用氨熏蒸后轉成深蓝色。蓝色迅速减褪(酚铵失去了氨),但重新暴露于氨,色即恢复。
鉴定限度:0.5微克 维生素B6
因酚类和2,6-二氯苯醌-4-氯亚胺有反应,各种还原性維生素会使試剂还原而耗掉,这个試驗不能直接应用于有酚类或本身为还原剂的各种维生素(维生素B1、B2和C)存在时。在这些情况下,应在微量离心管中,将試液一滴用磷钼酸的饱和水溶液1~2滴处理,使维生素B6(一种吡啶衍生物)沉淀成磷钼酸盐。任何存在的还原性化合物将被氧化而形成水溶的钼藍,而不能氧化的酚类和酚性化合物都留下来未变。离心分离这蓝色悬浮液,沉积物用水洗滌一次,再进行离心分离,然后悬浮于1~2滴水中。取悬浮液一滴放試剂紙上,用氨熏蒸。磷钼酸盐发生分解,并将释出的维生素B6进行靛酚反应。磷鎢酸也可用来沉淀出维生素B6。