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甲烷直接催化氧化制甲醇


化学先生 / 2019-07-30

       甲烷直接催化氧化制甲醇是甲烷单加氧酶最基本的催化反应,在自然界已发现的天然酶中,只有甲烷单加氧酶具有这一催化功能。目前,被公认的反应机制是甲烷单加氧酶中的羟基化酶(MMOH)、还原酶(MMOR)和调节蛋白B (MMOB)必须协同作用,才能活化甲烷和分子氧,将一个氧原子插入到甲烷的C--H键中生成甲醇,因此甲烷单加氧酶是包含三个组分的酶系。和其它氧化还原酶一样,为了活化分子氧,在反应中还需要辅酶NADH作为电子给体,还原酶能从NADH接受电子,将其传递给羟基化酶:而调节蛋白B则在还原酶和羟基化酶之间的电子传递过程中起促进作用,提高甲烷单加氧酶的催化活性。这一反应机制,已被来源于不同菌株的甲烷单加氧酶的催化化学研究所证实。


        研究还发现,sMMO的催化活性要比pMMO高,不同来源的sMMO,其理化性质、催化功能与蛋白质序列都非常相似。在甲烷氧化菌细胞中,由甲烷催化氧化生成的甲醇,会在甲醇脱氢酶的作用下生成甲醛,大约有50%的甲醛被同化,作为细胞生长的碳源,另外的50%甲醛在甲醛脱氢酶的作用下,进一步氧化形成甲酸,最后再通过甲酸脱氢酶转化为二氧化碳和水,获得细胞生长所需要的能量。NADH在分子氧活化中失去电子后被氧化为NAD+,NAD+在甲醇、甲醛和甲酸的后续脱氢反应中可以再生为NADH,因此在甲烷氧化菌细胞中,甲烷催化氧化生成甲醇的反应不需要添加外源电子给体。sMMO的电子给体是NADH,但pMMO的电子给体是否也为NADH尚不清楚,据推测有可能是细胞色素B559/569或细胞色素C/C553.

        在甲烷单加氧酶细胞外进行甲烷催化氧化制甲醇反应,也可以采用四甲基对苯二酚和NADH2作为外源电子给体,但必领考虑辅酶再生和循环使用问题。从应用角度考虑,最好使反应在整细胞中进行,可以免去提酶,并且在细胞内有天然的电子给体系统和完美的MMO三组分协调作用机制,以保证催化反应的稳定、高效与连续性。但作为甲烷氧化细菌的能源和碳源,甲烷被氧化为甲醇后,在细胞中一系列脱氢酶的作用下会被继续氧化,最后生成CO2和H2O.若想累积甲醇,必须阻断它的后续氧化过程,而细胞中没有甲醛生成,不但会影响细胞的代谢过程,也丧失了NAD+还原为NADH的动力。目前,尚未找到解决这一矛盾的有效途径,从而影响了甲烷生物催化氧化制甲醇,以及其它类似的生物催化氧化过程在化学工业中的实际应用。
 

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