酶的固定化方法一一交联法和包埋法
化学先生 / 2019-08-03
1：交联法
交联法是 采用双功能团试剂或多功能团试剂进行酶分子之间的交联，使酶分子和双功能团试剂或多功能团试剂之间形成共价键，得到三维的交联网状结构。除了酶分子之间发生交联外，还存在一定的分子内交联，根据使用条件和添加材料的不同，可制备不同物理性质的固定化酶。常用交联剂有戊二醛、双重氮联苯胺-2,2-二磺酸等。此法的优点是酶之间连接牢固，具有良好的稳定性及重复使用性，缺点是有时难以很好地控制反应条件，反应剧烈时，常常引起酶蛋白的高级结构发生变化，并导致活性中心受到破坏，从而难于保证每次都能制得高活力的样品。
2：包埋法
包埋法是将酶包裹于凝胶形成的网络结构中，或半透膜聚合物的超滤膜内使其固定化。
包埋法可分为网络型和微囊型两种。前者是将酶包埋于高分子凝胶细微网络内;而后者是将酶包埋在高分子半透膜中制备成微囊型。包埋法.般不需 要与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应，很少改变酶的空间构象，酶活回收率较高，因此可以应用于许多酶的固定化。但是包埋法制备的固定化酶，只适合用于小分子底物和产物的酶催化反应，因为只有小分子反应底物或产物，才可以通过高分子凝胶的网络进行扩散。此外，由这种固定化方法产生的扩散阻力，还会使固定化酶的动力学行为发生改变，从而降低酶活力。
总之，酶可以通过各种不同的方法进行固定化，但不管是通过物理的弱相互作用，还是通过较强的化学键结合，都必须采用不溶于水的材料作为固定化载体。但是任何一种固定化方法或固定化载体，都不可能适用于所有的酶，要想获得较好的固定化效果，必须根据具体的酶和催化反应类型，选择合适的固定化方法和载体。因此，和多相化学催化剂的制备一样，要想通过选择固定化方法和载体，制备出性能最佳的固定化酶，没有现成的规律可循，往往依赖于实际工作经验的积累，最后以是否能最大限度地保留酶活性和提高酶的稳定性为评价标准。图8-1形象地描述了几种制备固定化酶的方法。
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