双波长分光光度法测定安钠咖注射液中咖啡因的含量
实验室k / 2019-08-07
一、目的
(1)理解双波长法测定药物含量的原理。
(2)掌握在单波长分光光度计上用双波长法测定药物制剂含量的原理和方法。
二、提要
(1)双波长法是根据待测溶液在两个适当波长的吸收值之差与待测组分浓度成正比关系的定量方法。
(2)在无背景干找下，测定二元组分中一组分的计算公式为：
△A=(aλ1－aλ2)·c·L
式中：△A为混合物在λ1和λ2波长吸收度之差；λ1、λ2为干扰组分等吸收波长，亦为被测组分的测定波长；aλ1、aλ2为被测组分在λ1和λ2的吸光系数(用标准品测得)；c为被测组分的浓度；L为吸收池厚度。
三、仪器与试剂
(1)可见-紫外分光光度计：751型或751(G)型等；
(2)容量瓶：100ml2个、250ml2个、50ml1个、500ml1个、10ml3个；
(3)刻度吸管：10ml3支；
(4)安钠咖注射液样品，每1ml中含无水咖啡因0.12g、苯甲酸钠0.13g，药典规定均应为标示量的93～107.0％；
(5)咖啡因标准液：精密称取咖啡因标准品0.1g，置100ml容量瓶中，加水至刻度，再精密量取2.5ml此溶液于250ml容量瓶中，加水稀释至刻度；
(6)苯甲酸钠标准液：精密称取苯甲酸钠标准品0.1g，置于100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，精密量取5ml于50ml容量瓶中，用水稀释至刻度。
四、步骤
1.样品制备 精密量取安钠咖注射液2.5ml于250ml容量瓶中，加水稀释至刻度，再精密量取此液5ml，置于500ml容量瓶中，用水稀释至刻度。
2.测定
(1)咖啡因紫外吸收光谱的描绘：吸取咖啡因标准液1ml，于10ml容量瓶中并加水至刻度，取稀释液于石英吸收池中，以水为空白液，测定不同波长的吸光度并绘吸收曲线。
(2)苯甲酸钠紫外吸收光谱的描绘：吸取苯甲酸钠标准液1ml，于10ml容量瓶中加水至刻度，取稀释液于石英吸收池中，以水为空白，测定不同波长下的吸光度并绘制吸收曲线。
(3)等吸收波长的选择：从苯甲酸钠吸收光谱图上找出等吸收波长λ1和λ2。
(4)测定标准咖啡因溶液在λ1和λ2的吸光度。
(5)样品中咖啡因含量的测定：取安钠咖样品液1ml于10ml容量瓶中，加水至刻度，以水为空白，测定其在λ1和λ2处的吸光度。
五、计算
△A=△acL
△A样/△A标=△ac样L/△ac标L=c样/c标
以标示量表示安钠咖中咖啡因的含量
S％=c样×稀释倍数/标示量×100％
六、思考题
1.用单波长分光光度计进行双波长法测定，应决定哪些条件?
2.怎样选择等吸收波长?
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